猪流行性腹泻病毒锁核酸探针荧光定量PCR检测方法的建立
李艳
卞志标
翟少伦
李春玲
广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站,广东广州 510640;岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心,广东茂名 525000
摘要：为建立一种快速、灵敏的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)早期痕量检测方法,该研究以PEDV的M基因为靶基因,设计了特异性引物和锁核酸(Locked Nucleic Acid,LNA)-TaqMan探针,经过条件优化,建立了基于LNA-TaqMan探针的PEDV荧光定量PCR方法,并与常规TaqMan探针法进行了比对.结果显示,所建立的PEDV的LNA-Taq-Man探针荧光定量PCR方法最低检测限为3.2拷贝/微升,较常规TaqMan探针法提高了10倍;与猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒和猪德尔塔冠状病毒等多种病原不存在交叉反应,特异性良好;批内和批间重复性结果的变异系数均小于1%,重复性较好.应用该方法对103份临床样品进行检测,结果显示,共检出PEDV阳性样品47份,阳性率45.63%,与常规TaqMan探针法检测结果的阳性符合率为90.38%.本研究建立的基于LNA-TaqMan探针的荧光定量PCR方法为PEDV的精准检测和流行病学调查提供了一种新的技术选择.
关键词：猪流行性腹泻病毒M基因LNA-TaqMan探针荧光定量PCR
分类号：S852.65+1(动物医学（兽医学）)
资助基金：广东省重点领域研发计划项目(2020B0202080004)广州市重点研发项目(202206010192)广东省科技计划项目(2023B0202010009)广东省农业科学院大广食品专家工作站建设项目(2023)广东省农业农村厅科技计划项目(2023KJ119)
论文发表日期：2024-04-18
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 30-36 )
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