毒害艾美耳球虫疫苗ENYS株TaqMan qPCR检测方法的建立
靳浩展1
肖文婉2
廖申权2
戚南山2
李娟2
吕敏娜2
蔡海明2
胡俊菁2
林栩慧2
宋勇乐2
陈祥杰2
朱易斌2
尹理君2
张健騑2
张旭3
孙铭飞2
1.佛山科学技术学院,广东佛山 528231;广东省农业科学院动物卫生研究所/农业农村部禽流感等家禽重大疫病防控重点实验室/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,广东广州 5106402.广东省农业科学院动物卫生研究所/农业农村部禽流感等家禽重大疫病防控重点实验室/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,广东广州 5106403.佛山科学技术学院,广东佛山 528231
摘要：为了对E.necatrix ENYS株在生产中进行质控及对临床应用效果的监测,该研究对ENYS株和ENGD株进行全基因组重测序,结合生物信息学分析建立了一种TaqMan qPCR检测技术.结果显示,En-marker5测序结果与预期相符,最优的引物浓度和探针浓度分别为500 nM和250 nM,标准曲线的斜率为-3.249,相关系数为0.999,可以通过Ct值对模板浓度定量,该方法检测下线为290个拷贝/反应和50个卵囊/反应,灵敏度是传统PCR的10倍;该方法可以特异性检测EnYS株,不能扩增其他种的疫苗株和野毒株以及肠道病原菌;重复性检测的变异系数小于0.6%,重复性良好.本研究针对E.necatrix EnYS株开发了一种灵敏度高、特异性强、稳定性好的TaqMan qPCR检测方法,为E.necatrix EnYS株的安全性评估及临床应用提供技术支持.
关键词：毒害艾美耳球虫减毒活疫苗全基因组重测序分子标记TaqMan qPCR
分类号：S852.7(动物医学（兽医学）)
资助基金：广东省农业科学院协同创新中心项目(XTXM202202)广东省畜禽疫病防治研究重点实验室项目(2023B1212060040)科技创新战略专项(202110TD,202122TD)广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项(2023KJ119)
论文发表日期：2024-08-18
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 1-8 )
英文信息