F亚群禽白血病病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的建立
潘洪艳1
李锦群1
李琪1
袁伊琳1
曹伟胜2
1.华南农业大学兽医学院,广东 广州 5106422.华南农业大学兽医学院,广东 广州 510642;广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室/人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室/农业农村部兽用疫苗创制重点实验室/农业农村部人兽共患病重点实验室,广东 广州 510642
摘要：为精准检测F亚群禽白血病病毒(ALV-F),该研究针对ALV-F流行毒株env基因设计了一对特异性引物F1/F2,建立了ALV-F的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法.条件优化试验结果显示,该方法最适退火温度为64.5℃,最适引物浓度为0.4 μM.利用最适反应条件建立的标准曲线方程为y=-3.303x+42.525,R2=0.997,扩增效率E=100.8%,重组质粒标准品拷贝数与Ct值具有良好的线性关系.特异性试验结果表明,该方法仅能特异性检测ALV-F,对ALV-A、ALV-B、ALV-J、ALV-K、禽流感病毒(AIV)、马立克病毒(MDV)、网状内皮组织增生病病毒(REV)和鸡传染性贫血病病毒(CIAV)无交叉反应;敏感试验结果表明,该方法最低检测限度为4.67×102拷贝/μL,敏感性是普通PCR的1 000倍;稳定性试验结果表明,批间和批内稳定性试验的变异系数均小于2%.利用该方法、ALV p27 ELISA和普通PCR方法分别对23份七彩山鸡胚所制备的原代细胞(PEF)样品进行检测,结果显示该方法和普通PCR方法阳性检出率均为95.65%(22/23),而ALV p27 ELISA阳性检出率仅为39.13%(9/23),该方法与普通PCR总符合率为100%,与ALV p27 ELISA总符合率为43.48%;进一步利用该方法、病毒分离法(结合ALV p27 ELISA)和普通PCR方法分别对20份七彩山鸡抗凝血样品进行检测,结果显示该方法和普通PCR方法阳性检出率分别为100.00%(20/20)和75.00%(15/20),两者总符合率为75.00%,而病毒分离法阳性检出率为0.00%(0/20).本研究建立的方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,能够有效检测临床样品,可以为ALV-F的精准检测提供技术支持.
关键词：禽白血病ALV-FSYBR Green Ⅰ荧光定量PCR
分类号：S852.65+7(动物医学（兽医学）)
资助基金：广东省重点领域研发计划项目(2020B020222001)广东省家禽产业技术体系(2023KJ128)国家肉鸡产业技术体系项目(CARS-41-G10)
论文发表日期：2025-04-18
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 23-29 )
英文信息