柔嫩艾美耳球虫广东株GAM56蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定
姜明慧1
宋勇乐2
苏观志3
陈庆彪4
李娟2
戚南山2
廖申权2
吕敏娜2
林栩慧2
蔡海明2
张旭1
孙铭飞2
1.佛山大学,广东 佛山 5282312.广东省农业科学院动物卫生研究所/农业农村部禽流感等家禽重大疫病防控重点实验室/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,广东 广州 5106403.温氏食品集团股份有限公司,广东新兴 5274004.河源市温氏禽畜有限公司,广东 河源 517000
摘要：为研究柔嫩艾美耳球虫GAM56蛋白的生物学功能,以柔嫩艾美耳球虫广东株配子体cDNA为模板,克隆该分离虫株的gam56基因编码序列.构建pET-B2M-GAM56截短表达载体,利用大肠杆菌表达系统通过IPTG诱导表达GAM56蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠制备GAM56多克隆抗体.通过间接ELISA和Western blot分析抗体的效价和特异性;收集E.tenella(GD)配子体阶段样品,利用GAM56多克隆抗体进行免疫荧光检测以评价其应用效果.结果显示:相比E.tenella(Houghton)参考虫株,E.tenella(GD)的gam56基因存在末端部分片段的缺失,CDS序列1 077 bp,可编码358个氨基酸;预测蛋白大小41.3 kDa.GAM56保守区域截短原核表达蛋白主要以包涵体形式存在.间接免疫荧光分析显示该抗体能够特异性识别配子体阶段的GAM56蛋白.该研究为进一步解析柔嫩艾美耳球虫广东株GAM56生物学功能提供了材料,为艾美耳球虫有性发育相关蛋白的功能研究与机制解析奠定基础.
关键词：柔嫩艾美耳球虫GAM56原核表达多克隆抗体
分类号：S852.72+3(动物医学（兽医学）)
资助基金：国家重点研发计划(2023YFD1802400)广东省农业科学院协同创新中心项目(XTXM202202)猪禽种业全国重点实验室项目(2023QZ-NK05)猪禽种业全国重点实验室项目(GDNKY-ZQQZ-K07)猪禽种业全国重点实验室项目(2022GZ07)猪禽种业全国重点实验室项目(2023QZ-NK14)科技创新战略专项(R2021PY-QY007,R2023PY-JG018)
论文发表日期：2025-06-18
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1-7 )
英文信息