人气道上皮细胞内皮素转换酶-1反义RNA构建

文思成; 徐军; 任筱兰; 钟南山

doi:10.3969/j.issn.1001-9448.2001.02.004

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DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2001.02.004

人气道上皮细胞内皮素转换酶-1反义RNA构建

文思成

徐军

任筱兰

钟南山

1.广东省广州呼吸疾病研究所2.广东省广州呼吸疾病研究所3.广东省广州呼吸疾病研究所4.广东省广州呼吸疾病研究所

摘要：目的研究内皮素转换酶-1（ECE-1）反义RNA对人气道上皮细胞ECE-1表达的抑制作用。方法构建ECE-1反义RNA表达载体，用脂质体(FuGENG 6)转染人气道上皮细胞株（16HBE），G418筛选得到稳定表达反义ECE-1 RNA的细胞株（anti-16HBE）。RT-PCR检测转染细胞ECE-1 mRNA的表达，Western bloting检测细胞ECE蛋白表达情况。结果①经酶切及DNA测序鉴定证明，0.7kb的ECE-1 DNA片段反向连接到带有萤光蛋白基因为报告基因的pEGPC1表达载体；荧光倒置显微镜显示大量细胞分泌荧光蛋白并能反复传代稳定表达；② anti-16HBE细胞ECE mRNA基因表达(ECE/actin β 0.012 5±0.058)比16HBE细胞(ECE/actin β 0.134 7±0.067)明显低(P＜0.05)；而Wester bloting亦显示anti-16HBE细胞ECE表达量比16HBE细胞明显低。结论ECE反义RNA表达载体可抑制人气道上皮细胞ECE-1表达与分泌。

关键词：内皮素转换酶核糖核酸反义载体构建

分类号：R56(呼吸系及胸部疾病)

资助基金：广东省自然科学基金(980456)

论文发表日期：2001-01-01

在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）

页数：3( 101-103 )

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广东医学

北大核心CSTPCD

ISSN：1001-9448

年,卷(期)：2001,22(2)

所属栏目：专题报道