结核杆菌分泌蛋白Ag85A基因的克隆、表达及其诊断价值
吴雪琼
张俊仙
王安生
张妍
周文强
郑冬燕
何菊芳
张涛
1.中国人民解放军第309医院结核病研究中心,北京,1000912.中国人民解放军第309医院结核病研究中心,北京,1000913.中国人民解放军第309医院结核病研究中心,北京,1000914.中国人民解放军第309医院结核病研究中心,北京,1000915.中国人民解放军第309医院结核病研究中心,北京,1000916.中国人民解放军第309医院结核病研究中心,北京,1000917.中国人民解放军第309医院结核病研究中心,北京,1000918.中国人民解放军第309医院结核病研究中心,北京,100091
摘要：目的获得重组抗原85A(rAg85A),研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值.方法应用基因工程技术克隆、表达、纯化Ag85A蛋白,通过Westem印迹分析其抗原性.分别以结核分支杆菌纯蛋白衍生物(PPD)或纯化的rAg85A蛋白为抗原,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)及结核病一步法检测血清中抗结核抗体.结果重组质粒pET30a-Ag85A测序表明与报道的序列相同.它在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的2%左右,Western印迹分析它与抗结核分支杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性.纯化的rAg85A样品纯度约85%左右,每100ml培养菌可获得2 mg左右的重组蛋白.以33例正常人血清的OD值+2 s为正常界限值,一步法的特异性和敏感性分别为87.9%和65.6%;PPD分别为93.9%和62.5%;rAg85A分别为93.9%和15.6%.结论pET30a-Ag85A大肠杆菌工程菌能以包涵体形式表达rAg85A蛋白,该蛋白具有较高的抗原特异性,但检测抗结核抗体的灵敏度低.
关键词：抗原 Ag85A基因 血清学诊断 分支杆菌结核
分类号：R52(结核病)
资助基金：总后勤部卫生部科研项目(2002-12)
论文发表日期：2002-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：2( 1258-1259 )
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