H9N2亚型禽流感病毒ns1基因克隆
林东子
张志珍
梁念慈
1.广东医学院生物化学与分子生物学教研室,广东,湛江,5240232.广东医学院生物化学与分子生物学教研室,广东,湛江,5240233.广东医学院生物化学与分子生物学教研室,广东,湛江,524023
摘要：目的 克隆A/Duck/Shantou/2088/01(H9N2)亚型禽流感病毒ns1基因,构建重组融合表达载体.方法 采用常规PCR方法扩增ns1基因cDNA,将扩增产物克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-3中,构建重组质粒pGEX-4T-3/ns1,转化BL21(DE3)宿主菌;采用EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切和序列分析鉴定插入的ns1基因;并用IPTG诱导工程菌,SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白的表达.结果 双酶切鉴定表明,ns1基因已正确克隆到GST融合表达载体中,测序结果证实ns1基因序列与目的基因序列完全一致.SDS-PAGE电泳显示,融合蛋白在BL21(DE3)工程菌中以可溶形式表达,重组融合蛋白GST-NS1的表达量占菌体总蛋白的20%左右.经Western blotting分析证实,重组融合蛋白可以被GST特异性抗体所识别.结论 本实验成功克隆了H9N2亚型禽流感病毒ns1基因,构建了融合表达载体,并进行了融合蛋白的诱导表达,为进一步研究NS1蛋白在流感流行中的作用打下基础.
关键词：H9N2亚型禽流感病毒ns1基因克隆融合蛋白
分类号：R3(基础医学)
资助基金：广东医学院校科研和教改项目(XB0405)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：2( 1791-1792 )
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