实时荧光定量PCR方法检测急性髓系白血病FLT3基因mRNA的表达
唐家宏1
徐兵2
宋小燕2
胡斌3
1.中国人民解放军第155医院2.南方医科大学南方医院血液科,广州,5105153.中山大学达安基因诊断中心,广州,510080
摘要：目的 构建检测急性髓细胞白血病FLT3基因mRNA表达的标准品重组质粒和荧光定量PCR方法,为进一步研究FLT3基因表达与急性髓细胞白血病的关系奠定基础.方法 利用引物设计软件设计出扩增FLT-3基因的引物和特异性荧光探针,提取K562细胞株总RNA,经RT-PCR扩增,产物纯化后与pUCm-T Vector连接,转化到大肠杆菌DH5α,筛选得到标准品的质粒FLT3P.建立荧光定量PCR检测FLT3基因技术方法,建立标准曲线并检测15例初治AML患者.结果 重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长,表明FLT3 cDNA已成功克隆.以106～102copies/μl不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增,所获得的Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系,标准曲线回归系数为0.9998.AML病例FLT3表达水平显著高于正常对照组(P=0.017),且不同病例的表达水平存在较大差异.结论 成功构建用于定量检测FLT3 mRNA表达的荧光定量PCR标准品和技术方法;AML病例FLT3表达水平显著增高. ,建立标准曲线并检测15例初治AML患者.结果 重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长 表明FLT3 cDNA已成功克隆.以106～102copies/μl不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增,所获得的Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系,标准曲线回归系数为0.9998.AML病例FLT3表达水平显著高于正常对照组(P=0.017),且不同病例的表达水平存在较大差异.结论 成功构建用于定量检测FLT3 mRNA表达的荧光定量PCR标准品和技术方法;AML病例FLT3表达水平显著增高. ,建立标准曲线并检测15例初治AML患者.结果 重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的
关键词：白血病髓细胞急性基因FLT3PCR实时定量
分类号：R73(肿瘤学)
资助基金：广东省科技计划(2004B30701005)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 377-379 )
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