B型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法的建立和临床应用
丘立文1
廖志勇1
王压娣1
丁细霞1
狄飚2
袁国勇3
车小燕1
1.南方医科大学珠江医院医学检验中心,广州,5102822.广东省广州市疾病预防控制中心,5100803.香港大学微生物系
摘要：目的 制备和鉴定B型流感病毒核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb),建立双抗体夹心捕获抗原EUSA,用于B型流感病毒感染的早期诊断.方法 用重组B型流感病毒N蛋白和B型流感病毒抗原免疫BALB/c小鼠制备mAb,采用ELISA间接法、免疫荧光(IFA)和免疫印迹(WB)进行筛选和鉴定,通过竞争抑制试验分析抗体识别表位,并采用抗体配对试验建立双抗体夹心捕获抗原ELISA检测B型流感病毒N抗原.结果 获得12株特异性针对B型流感病毒N蛋白的mAb,识别8个不同的抗原位点,根据mAb识别抗原表位,对mAb进行多种组合的配对试验,筛选出2株单抗BN4和BN8混合作为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的单抗BN1和BN5混合作为测定抗体,建立了双抗体夹心ELISA,测定新鲜的漱口液标本的灵敏度达100%,而对冻融的漱口液标本检测灵敏度为83.9%,与其他呼吸道病毒如A型流感病毒、副流感病毒等无交叉反应,特异度达100%.结论 获得特异性好的mAb,经过抗体的配对和优化,建立了一种灵敏度高、特异性强的B型流感病毒抗原的ELISA捕捉法,可用于B型流感病毒感染的早期实验室诊断及流行病学研究.
关键词：B型流感病毒核衣壳蛋白单克隆抗体ELISA
资助基金：广州市科技攻关计划(2005Z2-E0231)广东省科技攻关计划(20052070046)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1435-1438 )
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