hBcl-2和hVEGF_(165)双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定
倪晓彬1
陈敏生2
刘世明2
何晓青3
刘启才1
董颀2
赵路宁1
1.广东省汕头市中心医院,5150312.广州医学院第二附属医院、广州心血管疾病研究所,广州,5102603.广州医学院第三附属医院心内科,广州,510150
摘要：目的 构建hBcl-2和hVEGF_(165)双基因共表达的重组腺病毒载体,为后续基因转染和动物实验提供实验基础.方法 通过RT-PCR从A549细胞中分别获得hBcl-2和hVEGF_(165)基因片段,并克隆到pMD-19T载体.将目的 基因hBcl-2、IRES元件和hVEGF_(165)依次定向克隆到腺病毒穿梭载体质粒pAd-Track-CMV上.线性化重组穿梭质粒后通过电穿孔转化含有腺病毒骨架质粒pAd-easy-1的感受态大肠杆菌BJ5183构建重组腺病毒载体质粒.脂质体转染线性化的重组腺病毒载体质粒于HEK293细胞以包装制备重组腺病毒.重组腺病毒经PCR鉴定之后进一步扩增、纯化.通过荧光计数确定病毒感染滴度.结果 克隆的hBcl-2和hVEGF165基因测序正确,酶切重组穿梭载体质粒和腺病毒载体质粒得到特异酶切产物,重组腺病毒载体质粒转染HEK293细胞3 d后观察到GFP的表达,重组腺病毒的PCR得到hBcl-2和hVEGF_(165)基因的PCR产物,滴度测定为5×109 pfu/mL.结论 成功构建制备了高滴度的hBcl-2和hVEGF_(165)双基因共表达的重组腺病毒载体,为联合基因治疗心肌梗死的研究提供实验基础.
关键词：hBcl-2基因hVEGF165基因双基因共表达腺病毒载体
资助基金：广东省国际科技合作项目(2006B50107005)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 319-322 )
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