BAALC转录本1-6-8逆转录病毒表达载体的构建
萧平难
徐兵
宋小燕
陈国枢
史鹏程
张妍琰
周淑芸
1.南方医科大学南方医院血液科,广州,5105152.南方医科大学南方医院血液科,广州,5105153.南方医科大学南方医院血液科,广州,5105154.南方医科大学南方医院血液科,广州,5105155.南方医科大学南方医院血液科,广州,5105156.南方医科大学南方医院血液科,广州,5105157.南方医科大学南方医院血液科,广州,510515
摘要：目的 构建含BAALC(brain and acute leukemia, cytoplasmic)1-6-8转录本的逆转录病毒表达载体.方法 从KASUMI-1细胞株中提取mRNA,应用RT-PCR技术扩增BAALC 1-6-8获得目的 基因,选用pMDTM18-T Vector做TA克隆.分别双酶切TA克隆获得的阳性质粒和pcDNATM3.1/myc-His A+质粒,琼脂糖电泳纯化回收前者的小片段和后者的大片段,应用T4连接酶连接后转化至E.coli DH5α中.PCR扩增BAALC-myc-His基因序列,双酶切PCR产物和pLXSN载体,T4连接酶连接后转化至E.coli DH5α中,挑选阳性克隆,PCR、双酶切及测序鉴定.结果 PCR分别扩增TA克隆产物和重组pcDNATM3.1/myc-His A+-BAALC,在535 bp处均可见一清晰的特异性扩增条带,显示TA克隆及重组真核表达载体成功;PCR扩增pLXSN-BAALC-His大小为664 bp,双酶切及测序结果证实目的 基因片段正确插入到逆转录病毒表达载体pLXSN中.结论 分离得到了BAALC 1-6-8转录本基因,并成功构建了pLXSN-BAALC-His表达载体.
关键词：BAALCTA克隆双酶切逆转录病毒载体
资助基金：广东省科技计划(2007B030704010)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 1514-1516 )