携带HGF基因的重组腺病毒表达载体的构建
刘薇薇1
陈娟2
刘移民1
李素梅2
余卫1
陈嘉榆1
张成1
陈运贤3
林琛莅2
钟雪云2
1.广东省广州市第十二人民医院,5106202.暨南大学医学院病理学教研室,广州,5106323.中山大学附属第一医院血液科,广州,510080
摘要：目的 构建携带肝细胞生长因子HGF的重组腺病毒表达载体.为研究HGF的功能、作用机制及临床应用奠定基础.方法 以pcDNA3.0-HGF为模板,经PCR扩增得到HGF基因,将其插入到带有绿色荧光蛋白基因的穿梭载体pAdTrack-CMV-GFP中,得到重组质粒pAdTrack-CMV-HGF-GFP.将线性化的pAdTrack-CMV-HGF-GFP与pAdEasy-1质粒共转化BJ5183感受态细胞,进行同源重组,得到重组腺病毒质粒,经PacI线性化后,转染AD293细胞.结果 得到重组腺病毒,转染重组腺病毒DNA的AD293细胞经荧光显微镜能观察到AD293细胞内有绿色荧光,且出现细胞病变反应(cytopathic effects,CPE),对传代的Ad-HGF进行PCR分析证实得到目的 基因,感染CHL细胞,通过western blotting分析HGF蛋白表达量,从而证实重组腺病毒载体构建成功.结论 腺病毒制备简便,成本低,周期短,毒性小,产量高,感染率及蛋白表达率高,成功构建Ad-HGF为进一步研究HGF并最终使其在临床应用中更为方便提供实验基础.
关键词：重组腺病毒肝细胞生长因子基因治疗
资助基金：广州市医药卫生科技项目(2008-ZDi-04)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 1662-1664 )
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