miR-181a真核表达载体的构建及鉴定
吴文新1
付玉华2
沈玉光3
张逊3
田刚4
李书军5
1.河北医科大学第二医院病理科,石家庄,0500512.新疆自治区人民医院分院检验科,乌鲁木齐,8300543.天津胸科医院胸外科,3000514.天津市公安医院检验科,3000425.河北医科大学第二医院胸外科,石家庄,050051
摘要：目的 构建miR-181a真核表达载体,获得食管癌细胞TE11在其中稳定表达的细胞系,为研究miR-181a的功能以及其在食管癌细胞TE11中的作用机制奠定基础.方法 根据miR-181a成熟序列在基因组中的位置及其上下游250个碱基序列,以293T细胞基因组DNA为模板设计PCR引物,扩增包含miR-181a前体的序列,连接到线性化的pMD18-T Simple载体中,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后亚克隆到pcDNA3.1(+)中,并对重组质粒进行双酶切和测序分析;鉴定完全正确的重组质粒转染食管癌细胞TE11,用G418(350 mg/L)筛选4周获得miR-181a稳定表达细胞系TE11-miR-181a,提取TE11-miR-181a细胞总RNA,用real-time PCR鉴定pcDNA3.1(+)-miR-181a可在真核细胞中稳定过表达.结果 成功构建了miR-181a的真核表达载体,并获得了在TE11细胞中稳定表达重组质粒的细胞系TE11-miR-181a.结论 miR-181a真核表达载体在食管癌细胞TE11中稳定高表达,为进一步研究miR-181a在食管癌细胞TE11中的功能及基因调控机制奠定了基础.
关键词：食管癌MicroRNA真核表达载体pcDNA3.1(+)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 149-151 )