破伤风毒素C片段在乳链菌内的表达
杨晓强1
赵亚刚2
孙大勇2
姜泊3
陈学清4
1.中国人民解放军75600部队医院综合科,广东深圳,5180482.广州军区广州总医院消化内科,广州,5100103.南方医科大学南方医院消化内科,广州,5105154.广州医学院第一附属医院消化内科,广州,510120
摘要：目的 构建破伤风毒素C片段(TETC)乳链菌表达载体,并验证其生物活性.方法 将采用基因拼接方法 获得的TETC基因从测序正确的质粒pBS-TETC上以Sal Ⅰ、Hind Ⅲ切下,分别定向连接到以Xho Ⅰ、Hind Ⅲ 酶切的质粒分泌表达的乳链菌表达载体pNBC1000和膜锚定表达的乳链菌表达载体pNBC2000.电穿孔转化乳链菌,分别提取分泌蛋白及膜锚定蛋白,通过蛋白电泳及Western blot检测蛋白定位表达情况.结果 构建了分泌表达及锚定表达TETC的乳链菌表达载体pNBCL1002与pNBCL2002,电穿孔转化乳链菌获得了分泌表达及膜锚定表达TETC的乳链菌,SDS-PAGE分析显示分泌表达的TETC大小约为57.8 kD,表达量占总体蛋白的8.06%、上清蛋白的9.82%,锚定表达的TETC大小约为73.5 kD的表达蛋白,表达量占总体蛋白的10.7%、膜蛋白的17.9%; Western blot检测显示所表达的TETC均可与破伤风抗毒素血清发生免疫印迹.结论 成功构建了TETC乳链菌表达载体并在乳链菌内表达TETC,初步验证了表达的TETC的免疫反应性,这一结果 可能为进一步研究生物佐剂及防治破伤风疫苗奠定基础.
关键词：破伤风毒素C片段乳链菌生物佐剂疫苗
资助基金：国家自然科学基金(30570839)广东省自然科学基金(05004735)广东省教育部产学研结合项目(2009B090300354)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1644-1647 )
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