柯萨奇-腺病毒受体不同胞内功能域缺失突变载体的构建与表达
范良生
王鸿雁
王蓓蓓
陈刚
1.华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤生物医学中心,武汉,4300302.华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤生物医学中心,武汉,4300303.华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤生物医学中心,武汉,4300304.华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤生物医学中心,武汉,430030
摘要：目的 以柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)蛋白结构的功能解析作为切入点,构建不同CAR胞内域缺失突变的表达载体.方法 利用定点缺失突变策略构建CAR胞内域PKC、CK2、TYR磷酸化位点的缺失突变体及胞内域完全缺失的突变体.利用三步PCR法扩增获得相关的基因片段后,将其克隆入真核表达载体 pcDNA3.1/V5/His,通过双酶切及测序进行鉴定后,分别转染至低表达CAR的人卵巢癌细胞系SKOV3细胞中,并用Werstern blot检测细胞转染后CAR的表达水平.结果 所有突变体经过测序分析均证实序列与设想的突变序列相符,各突变体在SKOV3细胞中获得了满意的表达.结论 成功构建不同CAR胞内功能域缺失突变表达载体,为后续研究CAR及其胞内不同功能域在卵巢癌中的作用机制提供了研究基础.
关键词：柯萨奇-腺病毒受体功能域缺失突变重组体卵巢癌
资助基金：国家自然科学基金资助项目(30700895)国家自然科学基金资助项目(30672227)国家自然科学基金资助项目(30770913)科技部"973"计划资助项目(2009CB521808)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1945-1949 )
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