E2F-1截短体的诱饵载体的构建及检测
孔凡彪1
王晓通1
谢玉波2
肖强1
1.广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科,南宁,5300212.广西医科大学第一附属医院麻醉科,南宁,530021
摘要：目的 构建E2F-1截短体的诱饵载体,并进行自激活活性和诱饵蛋白毒性检测,为应用酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用蛋白建立实验基础.方法 设计引物,PCR扩增E2F-1截短体,引入酶切位点EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ,将E2F-1截短体连接至载体pGBKT7中,将构建成功的诱饵表达载体pGBKT7-E2F-1截短体转化到酵母菌AH 109中,采用选择性培养皿和β-半乳糖苷酶分析等方法分析检测重组质粒的自激活活性和细胞毒性.结果 成功扩增了E2F-1截短体,并连接至载体pGBKT7中,测序比对结果正确,成功转化到酵母菌AH 109中,经检测无自激活活性和细胞毒性.结论 成功构建了E2F-1截短体的诱饵载体,经检测无自激活活性和细胞毒性,可应用于酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用的蛋白.
关键词：E2F-1截短体诱饵表达载体酵母双杂交自激活
资助基金：国家自然科学基金(30860273)广西壮族自治区科学研究与技术开发项目(10124001A-22)广西医疗卫生重点科研项目(200912)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 2635-2637 )