人钙周期素结合蛋白基因亚细胞定位载体的构建和鉴定
仇长青1
赵盈盈1
冯珊珊1
王聪1
杨博1
余月华2
刘朋伟3
翟惠虹4
1.宁夏医科大学研究生学院,银川,7500042.宁夏医科大学第二附属医院消化内科,银川,7500043.上海交通大学医学院,上海,2000254.宁夏医科大学总医院消化内科,银川,750004
摘要：目的 构建编码人钙周期素结合蛋白(hCacyBP)基因的亚细胞定位载体并进行序列测定.方法 hCacyBP的模板来自人结肠癌细胞株HCT-116的cDNA序列,根据hCacyBP基因序列设计合成引物,采用PCR方法扩增编码hCacyBP的基因片段;将hCacyBP基因定向克隆到亚细胞定位载体pCMV/myc系列:pCMV/myc/nuc(胞核定位载体)、pCMV/myc/cyto(胞质定位载体).转化E.coli DH5α感受态细胞,在氨苄青霉素阳性LB培养基平板上筛选出阳性克隆.重组质粒经PCR及双酶切鉴定并进行序列测定.结果 从HCT-116的cDNA模板扩增684 bp的hCacyBP基因片段,分别构建重组质粒pCMV/myc/nuc-hCacyBP、pCMV/myc/cyto-hCacyBP,PCR及双酶切鉴定产物大小与预期值相符合,测序分析进一步表明所克隆的基因为编码hCacyBP的基因片段.结论 成功构建hCacyBP基因亚细胞定位载体,这将为研究结肠癌胞核、胞质内的hCacyBP功能和研究该基因异常高表达与结肠癌发生发展的关系奠定实验基础.
关键词：hCacyBP基因胞核定位载体胞质定位载体基因克隆
资助基金：国家自然科学基金(30860321)国家自然科学基金(NZ0897)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 2917-2919 )
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