人源性Jagged1RNAi慢病毒载体的构建及鉴定
张同韩1
刘海潮2
梁玉洁2
梁立中2
廖贵清2
吴纪楠1
黄洪章2
1.广东省中山市人民医院口腔医疗中心,广东中山,5284032.中山大学光华口腔医学院、附属口腔医院口腔颌面外科,广州,510055
摘要：目的 构建人源性Jagged1 RNAi慢病毒载体,并观察其对舌癌细胞中Jagged1的敲减作用.方法 GenBank检索人Jagged1信息,设计Jagged1靶点.BLAST比对同源性,合成双链DNAoligo.线性化的RNA干扰载体质粒pAJ-U6-shRNA-CMV-eGFP/PuroR,双酶切,与合成的双链DNAoligo连接,转化感受态细胞,选择阳性克隆进行鉴定.慢病毒三质粒系统共转染293T细胞,包装,纯化,并转染Tca8113以及Cal27细胞,测定转染效率.PCR及Western Blot 检测Jagged1基因及蛋白表达变化.结果 成功构建靶向Jagged1 RNAi载体质粒,并成功进行慢病毒包装.该系统可有效地感染Tca8113及Cal27细胞.细胞内Jagged1基因及蛋白表达均有明显下调.结论 成功构建Jagged1RNAi慢病毒载体,为下一步研究Jagged1在人舌鳞癌的中的作用机制奠定基础.
关键词：Notch信号Jagged1舌癌RNA干扰慢病毒
资助基金：国家自然科学基金(30772442)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 903-907 )
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