一氧化氮合酶基因转染小鼠内皮祖细胞的实验研究
党胜春
陈荣芳
王平江
冯舒
张建新
1.江苏大学附属医院普外科 江苏镇江2120012.江苏大学附属医院普外科 江苏镇江2120013.江苏大学附属医院普外科 江苏镇江2120014.江苏大学附属医院普外科 江苏镇江2120015.江苏大学附属医院普外科 江苏镇江212001
摘要：目的 探讨利用脂质体介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因体外转染小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPC)的可行性.方法 密度梯度离心法分离ICR小鼠骨髓来源单个核细胞培养制备小鼠EPC并鉴定;构建、扩增、提取并纯化pcDNA3.0/eNOS基因质粒;用EPC培养基配成2×105·mL-1细胞悬液,按0.6 mL/孔重新铺6孔板,待细胞生长至80％左右融合时,用脂质体LipofectamineTM 2000体外转染eNOS基因至EPC.转染48 h后,采用RT-PCR检测EPC中eNOS的表达,硝酸还原酶法检测EPC中一氧化氮(NO)的含量,荧光探针DCFH-DA活性氧检测氧自由基(ROS)的含量.结果 成功培养EPC,成功构建pcDNA3.0/eNOS基因载体.转染48 h后,EPC中eNOS表达量明增加(P＜0.01),NO含量明显升高(P＜0.01),ROS含量明显降低.结论 脂质体介导eNOS基因能够有效转染小鼠EPC,并能在EPC中有效表达.
关键词：内皮祖细胞内皮型一氧化氮合酶基因一氧化氮氧自由基
资助基金：国家自然科学基金(81070287)江苏省自然科学基金(BK2011484)江苏省博士后科研项目(1302096B)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 3464-3467 )
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