基于基因转染法的胸苷磷酸化酶高表达结肠癌细胞株的建立
王绮雯1
刘剑2
叶钿均2
张继民2
1.广州医科大学附属第二医院外科实验室 广州 5102602.广州医科大学附属第二医院胃肠外科 广州 510260
摘要：目的：构建表达高度胸苷磷酸化酶（TP）活性并可以稳定传代的结肠癌细胞株。方法合成包含TP cDNA 全长的真核细胞表达载体，用慢病毒包装后转染人结肠癌细胞株 SW480、LOVO、HT29和 LS174T，流式细胞仪检测转染效率，实时荧光定量 RT －PCR 方法检测 TP 的 mRNA 表达，蛋白印迹法（Western blot）检测 TP 蛋白表达。结果转染 TP cDNA 后，SW480、LOVO、HT29与 LS174T 在传代5代后转染效率仍稳定在95％左右。与未转染 TP 基因的亲代细胞相比，SW480－TP、LOVO －TP、HT29－TP 与 LS174T －TP 的 TP mRNA 的表达分别提高了（694．56±171．53）、（282．46±86．85）、（8．45±0．15）和（2615．02±253．97）倍，差异有统计学意义（P ＜0．05）；并且 TP 蛋白的表达水平也显著提高。结论慢病毒载体能够高效地将 TP cDNA 转染至人结肠癌细胞 SW480、LO－VO、HT29和 LS174T 中，所得克隆能够稳定传代，并能显著提高4株结肠癌细胞 TP 的 mRNA 和蛋白表达水平。
关键词：胸苷磷酸化酶基因转染慢病毒结肠癌细胞株
资助基金：国家自然科学基金(81071883)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 30-34 )
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