靶向 RECQL4基因的 shRNA 慢病毒表达载体的构建及鉴定
陈泓磊
吴晓滨
王华摄
林义佳
彭俊生
1.中山大学附属第六医院食管胃肠外科 广州 5106552.中山大学附属第六医院食管胃肠外科 广州 5106553.中山大学附属第六医院食管胃肠外科 广州 5106554.中山大学附属第六医院食管胃肠外科 广州 5106555.中山大学附属第六医院食管胃肠外科 广州 510655
摘要：目的：构建介导 RECQL4 RNA 干扰的 shRNA 慢病毒表达载体。方法将人工合成的 RECQL4 siR－NA 经 PCR 扩增后与线化的 pLKO．1慢病毒表达载体连接，经测序鉴定后，将 pLKO．1－RECQL4－shRNA 与慢病毒包装质粒共转染入 HEK －293T 细胞，产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度。体外感染人结肠癌细胞 RKO 后，实时定量 PCR 和 Western blot 检测 RECQL4 mRNA 和蛋白的沉默效果。设置未加入任何慢病毒表达载体的 RKO 细胞为未感染组，感染 pLKO．1－scramble －shRNA 慢病毒载体为阴性对照组。结果基因测序结果证实成功构建 pL－KO．1－RECQL4－shRNA 慢病毒表达载体。测定包装后的慢病毒颗粒滴度为6.70×107 IU／mL。感染 RKO 细胞后，RECQL4的 mRNA 和蛋白表达量均低于阴性组和未感染组。结论成功构建靶向 RECQL4基因的 shRNA 慢病毒表达载体，可有效抑制人结肠癌 RKO 细胞 RECQL4 mRNA 和蛋白的表达。
关键词：慢病毒表达载体RECQL4shRNA结肠癌
资助基金：广东省科技计划(2010B031500009)高等学校博士学科点专项科研基金(2011017110075)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 685-687 )