大鼠miR-21慢病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达
付霞霏
何援利
纪露露
苏少敏
阮晓珍
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摘要：目的 采用分子生物学方法构建miR-21慢病毒载体,并感染骨髓间充质干细胞(MSCs),建立稳定表达miR-21的MSCs细胞系.方法 合成大鼠miR-21基因序列,进行PCR扩增后,连接到慢病毒表达质粒pLVX-shRNA2中.对其进行双酶切及基因测序鉴定,证实载体pLVX-shRNA2-rno-miR-21-5p的成功构建.对载体进行包装、测定病毒滴度.分4组:MSCs组不转染病毒液,空载组转染空载病毒液,miR-21组1用miR-21慢病毒载体以MOI 20转染MSCs,miR-21组2用miR-21慢病毒载体以MOI 40转染MSCs.将慢病毒颗粒以不同感染复数(MOI)感染MSCs,检测感染效率,使用实时定量PCR法检测MSCs中miR-21的表达.结果 目的基因与慢病毒载体成功连接.病毒滴度约为6×108 CFU/mL.载体成功感染MSCs,转染效率达90％以上.实时定量PCR检测结果证实miR-21组1(MOI为20)、miR-21组2(MOI为40)miR-21表达量分别为4.05±0.07、4.06_±0.04,与MSCs组(1.07±0.05)及空载组(1.12±0.05)相比差异有统计学意义(F=3 014.962,P=0.000).结论 采用分子生物学方法成功构建了大鼠miR-21慢病毒载体系统pLVX-shRNA2-rno-miR-21-5p,并成功转染MSCs,得到稳定表达miR-21的MSCs细胞系,从而为进一步研究miR-21的生物学特性提供实验基础.
关键词：miR-21慢病毒骨髓间充质干细胞大鼠
资助基金：国家自然科学基金(81300462)广东省科技计划(2012B031800123)广东省高等学校优秀青年创新人才培养计划(育苗工程)项目(2012LYM_0034)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 3598-3600 )
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