大肠癌细胞 XRCC2基因对电离辐射损伤的反应

王芹; 王敬敏; 徐畅; 王彦; 杜利清; 樊飞跃; 刘强

摘要：目的：构建稳定的XRCC2基因沉默大肠癌细胞系及阐明沉默XRCC2基因表达的大肠癌细胞对电离辐射损伤的反应。方法采用Western blot法检测不同肿瘤细胞系人大肠癌细胞系（ T84、HT29、Lovo）、食管癌EC9706细胞、乳腺癌MCF－7细胞和人正常胚肾HEK293细胞中XRCC2蛋白的表达水平。大肠癌T84细胞经0、2、4、8、12 Gy X射线照射后和8 Gy X线照射后0、6、24、48 h，用Western blot法和实时定量PCR法测定XRCC2蛋白和mRNA的表达水平。将XRCC2 shRNA质粒转染T84细胞，用嘌呤霉素进行细胞筛选，采用Western blot法和实时定量PCR法，检测沉默XRCC2蛋白和mRNA表达的效率。将XRCC2 shRNA质粒转染T84细胞，经X线照射后，采用单细胞凝胶电泳测定沉默XRCC2基因表达的T84细胞的DNA损伤修复。结果与人正常胚肾HEK293细胞相比，在不同肿瘤细胞系中XRCC2蛋白均呈不同程度的高表达，其中在大肠癌T84细胞中XRCC2蛋白表达最高。随着X线照射剂量的增加，T84细胞中XRCC2蛋白的表达水平逐渐升高，8 Gy照射后XRCC2蛋白表达水平在48 h内随着时间的延长而逐渐升高；XRCC2 mRNA表达也表现出随剂量增加和时间延长而逐渐升高。与未处理的细胞相比，转染XRCC2 shRNA质粒的细胞中XRCC2蛋白和mRNA表达明显下降，约分别减少了70％和60％。照射后的T84细胞DNA损伤修复中shRNA－XRCC2组TDNA％、TM和OTM均显著高于未处理组和shR-NA－SC组，差异有统计学意义（t＝15.12、11.36、13.15，P＜0.01）。结论成功建立了稳定表达XRCC2基因沉默的大肠癌T84细胞系，XRCC2基因沉默导致辐射诱导的DNA损伤修复能力下降。