青藤碱对大鼠肥大细胞RBL－2H3活化的影响及机制

史栋梁; 郭会卿

摘要：目的：探讨青藤碱对大鼠肥大细胞RBL－2H3活化的影响及其作用机制。方法将培养的大鼠RBL－2H3细胞随机分为对照Ⅰ组和青藤碱组。青藤碱组用青藤碱溶液处理，对照Ⅰ组则用PBS处理。利用生化法检测两组细胞培养上清中β－氨基己糖苷酶释放率，并用荧光定量PCR和Western blot方法检测细胞中信号调节蛋白α（SIRPα）mRNA和蛋白的表达水平。构建SIRPα过表达重组质粒或SIRPαsiRNA，将RBL－2H3细胞分为对照Ⅱ组、空载质粒组、过表达组、对照Ⅲ组、空白组、沉默组，对照Ⅱ组和对照Ⅲ组不进行转染，空载质粒组转染空白质粒，过表达组转染SIRPα过表达质粒，空白组转染非特异性siRNA，沉默组转染SIRPαsiRNA，转染结束后向对照Ⅲ组、空白组、沉默组添加青藤碱处理，并检测SIRPα的表达及炎症因子白细胞介素（ IL）－4、IL－6和肿瘤坏死因子－α（ TNF－α）的含量。结果与对照Ⅰ组比较，青藤碱组细胞中β－氨基己糖苷酶释放率显著降低（P＝0．000），SIRPαmRNA及蛋白表达量均显著升高（P＝0．000）。与对照Ⅱ组和空载质粒组比较，过表达组细胞中SIRPαmRNA表达量显著升高（P＝0．000），IL－4、IL－6和TNF－α含量均明显降低（P＝0．000）。与对照Ⅲ组和空白组比较，沉默组细胞SIRPαmRNA表达量显著降低（P＝0．000），IL－4、IL－6和TNF－α含量均显著升高（ P＝0．000）。结论青藤碱处理能够显著抑制大鼠RBL－2H3细胞活化并上调细胞中SIRPα基因的表达，而SIRPα基因介导了青藤碱的这种抑制作用。