抑制miR-140腺相关病毒载体的构建及鉴定
贺鹏1
段莉2
梁宇杰3
1.南方医科大学附属深圳恒生医院口腔科,广东深圳,5181022.广东省深圳市第二人民医院中心实验室、深圳市组织工程重点实验室,5180353.北京大学深圳研究生院化学生物学与生物技术学院,广东深圳,518055
摘要：目的 构建一种抑制microRNA-140(miR-140)表达的腺相关病毒(AAV)载体系统,从而实现对细胞内miR-140表达水平的高效抑制.方法 应用分子生物学方法将腺相关病毒载体与miRNA诱饵microRNA tough decoy RNAs (TuD)相结合,构建pAAV-U6-miR-140-TuD-EGFP表达质粒;用脂质体转染法将pAAV-U6-miR-140-TuD-EGFP表达质粒和pAAV-RC、pAAV-Helper质粒共转染至AAV-293细胞中,包装生成携带miR-140-TuD的重组腺相关病毒rAAV-U6-miR-140-TuD-EGFP.进一步将病毒感染骨肉瘤细胞U2OS,定量RT-PCR检测miR-140-TuD对细胞内miR-140基因的沉默效果,并测定病毒的感染滴度.结果 DNA测序证明miR-140-TuD已成功构建到表达质粒pAAV-U6-MCS-EGFP中;AAV-293细胞表达绿色荧光蛋白提示共转染成功;rAAV-U6-miR-140-TuD-EGFP感染滴度约为4.1 ×1010· mL-1;包装的重组腺相关病毒rAAV-U6-miR-140-TuD-EGFP感染U2OS细胞后,能显著下调U2OS细胞miR-140基因的表达水平.结论 携带miR-140-TuD重组腺相关病毒的包装成功,该病毒具有稳定沉默miR-140基因从而降低其表达水平的功能.
关键词：腺相关病毒miR-140 tough decoy骨肉瘤细胞
资助基金：国家自然科学基金(81260161)国家自然科学基金(81000460)深圳市科创委基础研究项目(JCYJ20140414170821160)广东省深圳市科技计划(201003462)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 970-973 )
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