人微小非编码RNA-183和MMP-9对食管癌细胞Eca109增殖的作用及其相互调控关系
梁宇强1
王茂生2
梁清1
刘文健3
黄健1
1.广东省茂名市人民医院胸外科,5250002.广东省高州市人民医院胸外科,5252003.安徽中医药大学第一附属医院胸外科,合肥,230031
摘要：目的 探讨人微小非编码RNA-183(Hsa-miR-183)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在食管癌组织和食管鳞癌细胞株Eca109中的表达及相互调控关系.方法 采用RT-PCR法检测食管癌组织、食管正常组织、正常食管上皮细胞Het-1A和Eca109细胞株中Hsa-miR-183与MMP-9的相对表达水平.构建人Hsa-miR-183的真核表达载体质粒PmiR-183,以脂质体2000转染至Eca109细胞,Eca109细胞分为3组:空白对照组不含任何质粒或脂质体,阴性对照组含空质粒2 000 μg/mL、脂质体20 μg/mL,PmiR-183组含PmiR-183 20μg/mL.构建psiCHECK-2-MMP-9-3'UTR载体.WST-8法检测细胞增殖抑制率,RT-PCR法检测Hsa-miR-183及MMP-9 mRNA的表达水平,Western blot法检测MMP-9蛋白的表达水平;荧光素酶报告基因实验验证Hsa-miR-183与MMP-9的靶位关系,设计针对MMP-9序列的小干扰RNA,转染Eca109细胞株,检测Hsa-miR-183的相对表达水平.结果 Hsa-miR-183在食管癌组织和Eca109细胞株中的相对表达水平较食管正常组织和Het-1A细胞株中低(P＜0.05),MMP-9在食管癌组织和Eca109细胞株中的相对表达水平较食管正常组织及Het-1A细胞株中高(P＜0.05).与阴性对照组比较,PmiR-183组对Eca109细胞24、48、72 h的增殖抑制率差异有统计学意义(P＜0.05),呈时间-效应关系;psiCHECK-2-MMP-9-3'UTR质粒与Hsa-miR-183共转染293T细胞,荧光素酶的活性降低;转染PmiR-183至Eca109细胞后,MMP-9基因mRNA与蛋白表达水平均降低;敲除MMP-9表达之后,Hsa-miR-183的表达水平显著升高.结论 PmiR-183可有效抑制Eca109细胞的增殖,呈时间-效应关系,Has-miR-183可能参与MMP-9在Eca109细胞的表达调控.
关键词：人微小非编码RNA-183基质金属蛋白酶-9食管癌Eca109细胞株细胞增殖
资助基金：广东省医学科学技术研究项目(A2012739)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 981-984 )
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