端粒结合蛋白CTC1提高人乳腺癌细胞放射抗性的潜在作用机制
刘礼1
袁昌劲1
余涛1
吕秀玮1
刘娇萍1
赖晓晶2
贺文煜1
1.华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院肿瘤科,湖北武汉,4300122.武汉生物工程学院药学院,湖北武汉,430415
摘要：目的 探讨端粒结合蛋白CTC1 提高人乳腺癌细胞放射抗性的潜在作用机制.方法 以单纯转染试剂的细胞作为空白对照( Mock组),siNC 转染细胞作为阴性对照(siNC 组),siCTC1#3 转染细胞作为实验组(siCTC1#3 组). MDA-MB-435/MDA-MB-435R 细胞分别以3×105个细胞浓度接种于铺有细胞爬片的6 孔细胞培养皿中,待6 h 左右细胞贴壁后,将细胞分为未处理组( untreated 组)、单纯射线照射组( IR组)、siCTC1#3 干扰组和射线照射联合siCTC1#3 干扰组(IR+siCTC1#3 组).将siRNA (siCTC1#3和siNC)利用脂质体转染至MDA-MB-435/MDA-MB-435R 细胞48 h 后CCK8 试剂盒检测细胞增殖及细胞毒性;台盼蓝染色测定细胞增殖动力学;Real time PCR 检测细胞相对端粒长度;免疫荧光检测细胞的DNA 损伤修复能力及CTC1 蛋白与γH2AX 的共定位情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;检测细胞Caspase-3的活性以明确细胞早期凋亡事件的触发情况.结果 siCTC1#3组与siNC 组、Mock组增殖能力、相对端粒长度相比,差异有统计学意义(P＜0.05);siCTC1#3 组并没有明显引起细胞周期时相的改变(P ＞0.05);MDA -MB-435R 细胞与MDA-MB-435 细胞相比,对数生长期的增殖速度、相对端粒长度、γH2AX 焦点的数量差异有统计学意义(P＜0.05);IR+siCTC1#3组与IR组相比,γH2AX 的数量、细胞凋亡率、坏死率差异有统计学意义(P＜0.05);在转染后24 h,MDA-MB-435和MDA-MB-435R细胞中siCTC1#3组Caspase-3的活性分别为相应Mock 组的(4.36 ±0.53)倍和(3.21 ±0.24)倍(P＜0.01).结论 端粒结合蛋白CTC1 提高人乳腺癌细胞放射抗性的机制与该蛋白促进肿瘤细胞增殖、促进DNA 损伤修复、抑制端粒缩短和抗细胞凋亡有关,而与调节细胞周期进程无关.
关键词：细胞凋亡端粒细胞周期DNA损伤修复
资助基金：武汉市临床医学科研项目(WZ17Z03)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1148-1153 )