利用Tet-on诱导基因表达系统构建EID3基因真核表达载体及稳定转染细胞株的建立
王燕
王宇暄
刘亚敏
张桂强
苏文洲
郭奇峰
1.华南理工大学附属第二医院鹤洞分院骨科 广东广州5103802.华南理工大学附属第二医院鹤洞分院骨科 广东广州5103803.华南理工大学附属第二医院鹤洞分院骨科 广东广州5103804.华南理工大学附属第二医院鹤洞分院骨科 广东广州5103805.华南理工大学附属第二医院鹤洞分院骨科 广东广州5103806.华南理工大学附属第二医院鹤洞分院骨科 广东广州510380
摘要：目的 构建类E1A细胞分化抑制因子3(EID3)真核表达载体,并转染人乳腺癌细胞(MCF-7),建立Tet-on诱导表达的目的基因EID3的稳定转染细胞系.方法 应用PCR技术,得到目的基因EID3的cDNA,通过双酶切、胶回收方法纯化目的片段EID3.DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pLVu-Tight-Puro,经菌落酶切、电泳以及测序鉴定.将真核表达质粒pLVu-Tight-Puro-EID3和pLVX-Tet-On Advanced Vector转染MCF-7细胞,分别通过G418和嘌呤霉素选择培养,建立由四环素(doxycycline,DOX)诱导表达的稳定转染细胞系,RT-PCR、Western Blot分别检测目的基因EID3在DOX诱导下mRNA以及蛋白的表达.结果 成功构建了pLVu-Tight-Puro-EID3表达质粒,并建立了由DOX诱导表达的稳定转染细胞系,可在DOX诱导下稳定表达EID3基因的mRNA及蛋白.结论 人EID3稳定表达细胞系为研究EID3基因在肿瘤辐射敏感性及药物敏感性的作用提供实验基础.
关键词：EID3MCF-7细胞Tet-on系统
资助基金：华南理工大学中央高校基本科研业务费资助项目(2017BQ111)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 2737-2740 )