基于探针熔解曲线分析技术的非缺失型地中海贫血基因检测方法的建立
胡晓艳1
吴宇亮2
李科铮2
钟宇萍2
徐颂周1
王存艳1
1.北京大学深圳医院新生儿科,广东深圳5180362.深圳鼎新融合科技有限公司研发中心,广东深圳518101
摘要：目的 结合多重不对称PCR技术和荧光探针熔解曲线法,建立一种快速、准确、简便的非缺失型地中海贫血基因检测方法 .方法设计针对9个常见非缺失型地中海贫血基因位点(αWSα、αQSα、αCSα、βIVSⅡ654、βCD-17、β-28、βCD41-42、βCD-71-72、βCD-26)的引物对、荧光探针以及对应等位基因的靶序列;使用熔解曲线法验证荧光探针与对应等位基因的靶序列的工作效果,确认不同基因型的熔解温度;使用30份已知基因型别的临床样本,提取全血样本的DNA并PCR扩增其9个等位基因目标片段,利用对应荧光探针的熔解温度变化区分不同位点的基因型;收集疑似地中海贫血病例的血液样本200例,按照双盲对照实验原则,分别用反向斑点杂交法试剂盒和多重不对称PCR探针熔解曲线法对这200例样本进行基因分型检测,比较两种方法的结果 是否一致,并对两种方法的优缺点进行比较.结果多重不对称PCR探针熔解曲线法可以同时对9个非缺失型地中海贫血的基因位点进行检测,并通过对应荧光探针的熔解温度的变化区分不同位点的基因型,检测结果与反向斑点杂交法相比较有相同的准确度,且有操作简便、耗时短、成本低、污染风险低等优势.结论 本研究建立了一种基于多重不对称PCR探针熔解曲线的基因分型方法,并成功用于9个非缺失型地中海贫血基因位点的诊断,该方法是一种简便、快速、低成本的检测方法,在地中海贫血筛查中有较好的应用前景.
关键词：地中海贫血多重不对称PCR荧光探针熔解曲线
分类号：R556.7(血液及淋巴系疾病)Q7(分子生物学)
资助基金：深圳市科技计划基础研究项目(JCYJ20170307112202156)深圳市海外高层次人才创新创业计划(KQCY20170329155926962)深圳市留学人员创业前期费用补贴(2017020)
论文发表日期：2019-09-10
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 2444-2449 )
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