pEGFP-N1-BRCC3重组质粒的构建、鉴定及其表达
程芯育1
钟海凤2
徐绍业3
张聪慧1
韦睿妮2
邵晓云4
1.桂林医学院研究生学院 广西 桂林 5410042.桂林医学院生物技术学院 广西 桂林 5410043.桂林医学院科学实验中心 广西 桂林 5410044.桂林医学院人体解剖学教研室、广西脑与认知神经科学重点实验室 广西 桂林 541004
摘要：目的 构建pEGFP-N1-BRCC3真核表达重组质粒,鉴定并检测其在HEK293细胞中的表达.方法 根据去泛素化酶BRCC3(人的同源物称为BRCC36)基因cDNA克隆基因序列和表达载体增强绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-N1)质粒上的多克隆位点设计引物,利用RT-PCR从小鼠脑组织中提取BRCC3全长基因作为目的DNA片段,选择HindⅢ/Sal I内切酶将目的片段与pEGFP-N1真核表达裁体进行双酶切,然后用T4连接酶连接,导入大肠杆菌经过转化、抗性筛选、质粒提取等过程获得融合的重组质粒,并再次双酶切电泳后初步筛选出可能正确的重组质粒,进而寄送公司进行DNA测序分析,通过DNAMAN软件比对,鉴定出目的基因BRCC3成功插入pEGFP-N1的重组质粒,以脂质体介导法转染HEK293细胞,通过Western blot检测BRCC3蛋白的表达.结果 DNA测序结果显示,pEGFP-N1-BRCC3重组质粒中目的DNA序列及方向完全正确,开放阅读框正确无误,表明重组pEGFP-N1-BRCC3质粒构建成功,将其转染HEK293细胞后,Western blot检测BRCC3蛋白表达明显增加.结论 成功构建了pEGFP-N1-BRCC3真核表达重组质粒,并能在HEK293真核细胞中有效表达,为深入研究BRCC3基因在神经生物学领域的功能提供了实验基础.
关键词：BRCC3基因绿色荧光蛋白基因重组真核表达质粒
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)R34(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(31660269)国家自然科学基金(2016GXNSFBA380098)广西脑与认知神经科学重点实验室自由探索课题(GKLBCN-20170107)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 2705-2709 )
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