MDA-PCR检测痕量结核分枝杆菌核酸方法的建立
周林甫1
万群2
赵钢1
张红鸭3
1.西北大学医学院,陕西西安7100682.空军军医大学西京医院神经内科,陕西西安7100323.深圳大学总医院神经内科,广东深圳518055
摘要：目的 建立基于多重置换扩增及PCR(MDA-PCR)技术检测痕量结核分枝杆菌(M.tb)核酸的方法.方法 制备含有M.tb插入序列IS6110和IS1081的不同稀释浓度的质粒DNA标准品.MDA-PCR分别通过检测质粒DNA标准品和其他细菌标准株基因组DNA来验证该方法的敏感度及特异性.另外,通过对模拟结核性脑膜炎(TBM)患者脑脊液(CSF)标本检测,评价该方法检测临床标本的可行性.结果 MDA-PCR方法对质粒DNA标准品IS6110、IS1081基因的最低检测下限分别为10、25拷贝,其检测敏感度是ST-PCR方法的40～100倍.另外,该方法对5种其他细菌标准株基因组DNA的检测结果均为阴性,无非特异性反应发生.MDA-PCR对模拟TBM患者CSF中M.tb IS6110及IS1081基因的最低检测下限均为1CFU,其检测敏感度是ST-PCR的104～105倍.结论 MDA-PCR方法可提高对CSF中痕量M.tb核酸的检测效率,为TBM早期诊断提供了 一种新的研究策略.
关键词：多重置换扩增PCR结核性脑膜炎脑脊液
分类号：R74.02(神经病学与精神病学)R741.04(神经病学)
资助基金：国家重点研发计划(2016YFC0904500)
论文发表日期：2022-06-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 702-706 )
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