慢病毒载体介导的脂肪干细胞miR-1重组表达系统的构建
颜奕光1
韩春花1
何原2
雷桅3
1.广东医科大学附属医院心血管内科中心 广东湛江5240012.广东医科大学附属医院心血管疾病研究室 广东湛江5240013.广东医科大学附属医院广东省心血管疾病分子靶标与干预粤港澳高校联合实验室 广东湛江524001
摘要：目的 构建miR-1稳定过表达并且适于体内示踪的基因修饰大鼠脂肪干细胞(rASCs)模型.方法 首先对体外培养的rASCs进行表型鉴定及成骨、成脂诱导分化;然后观察重组慢病毒转染rASCs过程中不同感染复数(MOI)及有无添加聚凝胺(polybrene)对报告基因萤火虫荧光素酶(FLuc)表达和活性的影响;最后采用qRT-PCR检测miR-1-3p和miR-1-5p的表达水平.结果 通过观察FLuc介导酶促反应引起的生物发光筛选出最佳转染条件为MOI 60,且添加聚凝胺能增强慢病毒转染rASCs的效率;随后应用该条件转染rASCs构建miR-1稳定过表达模型,qRT-PCR结果显示miR-1-3p和miR-1-5p的表达水平分别升高了65.6倍和37.4倍(P<0.05),证实该模型构建成功.结论 慢病毒载体能成功介导外源基因在rASCs中稳定过表达,并且报告基因FLuc催化底物产生的生物发光有利于进一步的体内示踪研究.总言之,本研究为基因修饰细胞模型的构建提供了方法学基础,并为心肌组织再生修复提供新的工程细胞株.
关键词：脂肪干细胞基因修饰慢病毒转染稳定过表达miR-1
分类号：R34(基础医学)R331(人体生理学)
资助基金：国家自然科学基金(81970056)广东省自然科学基金资助项目(2019A1515011925)
论文发表日期：2023-04-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 423-428 )
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