糖尿病神经干细胞糖脂损伤模型的建立及ZCL278对其的影响
高琦1
郭雅茹2
顾婷婷2
吴志新2
邓姣2
1.空军军医大学基础医学院学员三大队九队(陕西西安 710032)2.空军军医大学第一附属医院麻醉与围术期医学科(陕西西安 710032)
摘要：目的 拟建立一种模拟高脂高糖引起的小鼠胚胎海马颗粒下区神经干细胞(neural stem cell,NSC)损伤的体外模型,探索CDC42在高脂高糖相关NSC损伤中的作用.方法 培养胚胎小鼠NSC,利用Sox2与Nestin免疫荧光染色明确培养细胞的干性与纯度.采用不同浓度葡萄糖及氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)分别培养和共培养神经干细胞,利用CCK8检测细胞活力,明确影响NSCs增殖的适宜糖、脂浓度,并采用高脂高糖共培养(HHM)或普通培养基(RM),CCK8法检测其对NSCs增殖、划痕实验及Transwell迁移实验检测其对NSCs迁移能力的影响.提取10周龄db/db动物,db+动物海马组织匀浆与不同条件体外培养NSC的蛋白匀浆,Western blot法检测CDC42表达量.并在体外实验中采用10 μmol/L ZCL278(CDC42特异性抑制剂)与高脂高糖共培养,检测干预CDC42对高脂高糖引起的NSC增殖障碍的治疗作用.结果 10～40 mmol/L的葡萄糖与25～35 μg/mL的ox-LDL均可造成体外培养神经干细胞的增殖障碍.最终选定10 mmol/L葡萄糖+25 μmol/L oxLDL作为HHM相关NSC损伤的模型,该浓度可在72 h内持续抑制神经干细胞的增殖,划痕实验与Transwell迁移实验也显示,同一浓度的糖脂损伤显著抑制了 NSC的迁移能力.糖尿病小鼠海马及NSC内CDC42表达增加.在体外使用CDC42的特异性抑制剂ZCL278可升高HHM培养的NSCss细胞活力,提示其可部分逆转HHM相关NSCs增殖障碍.结论 10 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L ox-LDL可模拟糖尿病动物神经干细胞的糖脂损伤,影响神经干细胞的增殖与迁移;CDC42的高表达参与了高脂高糖引起的神经干细胞增殖障碍;体外给予CDC42的特异性抑制剂ZCL278可部分逆转高脂高糖引起的神经干细胞增殖障碍.本研究结果可为糖脂代谢异常相关的NSC增殖迁移障碍提供体外模型,CDC42特异性抑制剂ZCL278可部分逆转高脂高糖相关的NSC增殖障碍.
关键词：糖尿病高脂血症神经干细胞神经发生认知功能障碍CDC42
分类号：R589.1(内分泌腺疾病及代谢病)R589.2(内分泌腺疾病及代谢病)
资助基金：国家自然科学基金(82171287)
论文发表日期：2024-05-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 545-552 )
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