鼻咽癌中Period2下调ERK/MAPK磷酸化水平的机制
张志娟1
马政1
康晶1
杨敬1
徐倩茹2
牛欣冉2
罗小丫2
王婧媛3
李海亮4
侯丽1
1.宁夏医科大学总医院耳鼻咽喉头颈外科(宁夏银川 750004)2.宁夏医科大学第一临床医学院(宁夏银川 750004)3.海南医科大学临床医学院(海南海口 570100)4.宁夏医科大学总医院放疗科(宁夏银川 750004)
摘要：目的 探讨生物钟基因Period2在鼻咽癌中下调ERK/MAPK磷酸化水平的分子机制.方法 用慢病毒对细胞进行感染,构建细胞系.采用Label-free蛋白质组学检测方法对PER2蛋白表达进行验证.采用不同浓度的ERK通路激活剂Ceramide C6干预各组细胞,MTT检测各组细胞的增殖能力,筛选最佳药物浓度和作用时间.采用ERK通路激活剂Ceramide C6干预细胞,正常对照组采用等剂量药物溶剂进行处理,分为6组.Western blot检测各组细胞PER2、ERK、p38MAPK、p-ERK、p-p38MAPK蛋白的表达.流式细胞术检测细胞周期,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力,进一步明确PER2调控ERK、MAPK磷酸化的机制.用免疫组化检测PER2、p-ERK在人体鼻咽癌样本中的表达,并分析PER2、p-ERK与鼻咽癌临床特点的相关性.结果 蛋白质组学检测结果示PER2过表达组的PER2蛋白表达明显高于阴性病毒对照组和空白对照组(P＜0.05).Top 20差异蛋白显示MAPK3在PER2过表达组和对照组差异有统计学意义(P＜0.05).MTT实验结果:不同药物浓度处理后,根据每组细胞抑制率,得出最佳的药物作用浓度10 μmol/L,最佳处理时间24 h.WB结果显示PER2过表达下调p-ERK、p-p38MAPK蛋白表达,ERK通路激活剂Ceramide C6干预后,在PER2-OE组中ERK、p38MAPK蛋白水平无明显变化,但p-ERK、p-p38MAPK蛋白表达水平上调,干预前后差异有统计学意义(P＜0.01).细胞周期实验结果显示:ERK通路激活剂Ceramide C6干预各组细胞后,使细胞在G1期的比例明显增加,而在G2期数量减少.Transwell实验结果显示PER2过表达抑制细胞侵袭能力,此种现象不能被磷酸激酶逆转.在鼻咽癌组织、鼻咽部黏膜中PER2蛋白、p-ERK蛋白表达阳性率差异有统计学意义(P＜0.05).PER2蛋白表达与肿瘤的T分期相关(P＜0.05).在鼻咽癌组织中PER2蛋白与p-ERK蛋白表达相关(P＜0.05).结论 PER2过表达下调ERK/MAPK磷酸化水平,可能不是直接作用于ERK和p38MAPK的磷酸化位点,而是与调控ERK和p38MAPK的关键节点有关.鼻咽癌组织中PER2蛋白呈低表达,p-ERK蛋白呈高表达,两者相关,并且与肿瘤的发生、发展关系密切.
关键词：鼻咽癌Period2生物节律ERK/MAPK信号通路
分类号：R739.63(耳鼻咽喉肿瘤)R766.3(咽科学、咽疾病)
资助基金：宁夏自然科学基金项目(2019AAC03210)宁夏自然科学基金项目(2019AAC03215)宁夏医科大学校级课题(XM20211041)宁夏重点研发项目(2022BEG03105)
论文发表日期：2024-10-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：11( 1255-1265 )
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