miR-200c-3p通过靶向KRAS调控ERK/AKT信号通路对肾癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响
陈烈钳
严秋霞
黄栋强
岳巍巍
谢进东
惠州市第一人民医院泌尿外科(广东惠州 516000)
摘要：目的 研究miR-200c-3p通过靶向Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(Kirsten rats arcoma-viral oncogene homolog,KRAS)调控细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路对肾癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法 以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法测定人肾上皮细胞系HREpiC和人肾癌细胞系786-O、769-P、Caki-2中miR-200c-3p、KRAS、ERK/AKT信号通路相关蛋白表达.体外培养786-O细胞并随机分为对照组、miR-200c-3p mimics 组、si-KRAS 组、NC-miR-200c-3p+NC-KRAS 组、miR-200c-3p mimics+pUC57-KRAS 组,分组转染后以qRT-PCR和免疫印迹法检测细胞miR-200c-3p、KRAS表达、ERK/AKT信号通路相关蛋白;以Edu染色、克隆形成实验检测细胞增殖;以流式细胞术检测各组细胞凋亡;以Transwell实验检测细胞迁移侵袭;以免疫印迹法检测细胞增殖(Cyclin D1)、凋亡(caspase-3、Cleaved caspase-3、Bax)及上皮间质转化(epi-thelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白[钙黏蛋白 E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)]表达.以上述分组转染后的各组786-O细胞构建移植瘤裸鼠,检测其肿瘤生长情况.以双荧光素酶报告基因实验对786-O细胞中miR-200c-3p对KRAS的靶向调节进行验证.结果 与HREpiC细胞相比,786-O、769-P及 Caki-2 细胞 miR-200c-3p 表达降低(P＜0.05),KRAS mRNA 及蛋白表达、p-ERK1/2/ERK1/2、p-AKT/AKT 升高(P＜0.05).与对照组相比,miR-200c-3p mimics 组、si-KRAS 组细胞凋亡率、caspase-3、Cleaved caspase-3、Bax、E-cadherin 蛋白表达升高(P＜0.05),KRAS mRNA 及蛋白表达、p-ERK1/2/ERK1/2、p-AKT/AKT、增殖率、克隆形成比例、迁移与侵袭数量、裸鼠肿瘤质量与体积、Cyclin D1与Vimentin蛋白表达降低(P＜0.05);NC-miR-200c-3p+NC-KRAS 组细胞各指标无明显变化(P＞0.05).与 miR-200c-3p mimics 组相比,miR-200c-3p mimics+pUC57-KRAS 组细胞凋亡率、caspase-3、Cleaved caspase-3、Bax、E-cadherin 蛋白表达降低(P＜0.05),KRAS mRNA 及蛋白表达、p-ERK1/2/ERK1/2、p-AKT/AKT、增殖率、克隆形成比例、迁移与侵袭数量、裸鼠肿瘤质量与体积、Cyclin D1与Vimentin蛋白表达升高(P＜0.05).结论 miR-200c-3p可通过下调KRAS表达而降低ERK/AKT信号通路传导活性,进而抑制肾癌细胞增殖、侵袭、体内生长、EMT和迁移,并促使其凋亡.
关键词：miR-200c-3pKirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物ERK/AKT肾癌增殖侵袭迁移
分类号：R737.11(泌尿生殖器肿瘤)R73-73(肿瘤学)
资助基金：广东省惠州市科技计划项目(2021WC0106267)
论文发表日期：2024-12-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 1549-1558 )
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