c-Jun靶向调控miR-182-5 p转录在偏瘫型脑瘫上肢功能康复中的机制研究
王优1
徐韵贤2
伍启泓1
蔡凯茵3
吴霖林3
刘力茹1
徐开寿1
唐红梅1
1.广州医科大学附属妇女儿童医疗中心康复科(广东 广州 512120)2.佛山市第一人民医院康复科(广东 佛山 528000)3.广州医科大学儿科学院(广东 广州 511436)
摘要：目的 探讨转录因子c-Jun能否靶向结合miR-182-5p,解析其靶向结合的具体位点,并探讨强制性运动疗法(CIMT)能否通过促进c-Jun/miR-182-5p转录以提高偏瘫型脑瘫(HCP)小鼠上肢运动功能.方法 慢病毒转染技术构建c-Jun敲低及过表达的Neuro-2a细胞并建立稳转株.蛋白免疫印记(Western blot)验证各组细胞c-Jun蛋白的表达情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)验证miR-182-5p的表达情况;染色质免疫共沉淀(ChIP)验证c-Jun与miR-182-5p的结合位点.随后,构建HCP小鼠模型,予以持续2 周的CIMT干预.行为学试验评估CIMT的干预效果,RT-qPCR实验验证各组小鼠左侧大脑运动皮层M1 区c-Jun、miR-182-5p的表达情况.结果 携带小干扰RNA(siRNA)的c-Jun敲低慢病毒si3(病毒滴度:5E+8 TU/mL)转染Neuro-2a细胞后,c-Jun蛋白表达明显降低(P<0.01);而c-Jun过表达(OE)病毒OE(病毒滴度:5E+8 TU/mL)转染Neuro-2a细胞后,c-Jun蛋白的表达显著升高(P<0.001).miR-182-5p的转录随着c-Jun表达的减少而显著下降(P<0.01);反之,miR-182-5p转录则随之显著增加(P≤0.001),两者呈现协同变化趋势.进一步研究发现c-Jun可与miR-182-5p启动子上游-1000～-1bp片段中多个位点结合,其中以Site 2(-71～-65 bp)结合最为明显(P<0.001).动物行为学试验提示,与HCP组相比,HCP+CIMT组小鼠在疲劳转棒试验(P<0.01)、上肢悬吊试验(P<0.01)中所停留时间均显著延长;并且小鼠脑内M1 区c-Jun、miR-182-5p转录水平也同步升高(P<0.001).结论 转录因子c-Jun主要通过靶向结合miR-182-5p启动子上游-71～-65 bp激活其转录活性.本研究从转录水平阐述c-Jun/miR-182-5p调控是CIMT提高HCP上肢功能的重要分子学基础.
关键词：c-JunmiR-182-5p转录调控偏瘫型脑瘫强制性运动疗法
分类号：R493(康复医学)R319(医用一般科学)
资助基金：国家自然科学基金(82472598)国家自然科学基金(81902309)广东省自然科学基金资助项目(2024A1515012920)广东省自然科学基金资助项目(2021A1515012543)广东省自然科学基金资助项目(2021A1515011303)广州市科技计划项目(2024A03J1103)广州市科技计划项目(2023A03J0919)广州市基础研究计划(2060206-328)广州地区临床特色技术项目(2023C-TS59)
论文发表日期：2025-03-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 399-406 )
英文信息