小鼠蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与序列分析
刘新光1
彭海艳2
陈小文1
郑克勤3
梁念慈1
1.广东医学院,生物化学和分子生物学研究所,广东湛江,5240232.广东医学院,96级医学检验系学生,广东湛江,5240233.广东医学院,医学遗传研究室,广东湛江,524023
摘要：目的:构建小鼠蛋白激酶CK2 β亚基cDNA重组表达质粒,以便深入进行CK2结构与功能的研究.方法:通过反转录PCR从NIH3T3 小鼠成纤维细胞中获得小鼠蛋白激酶CK2 β亚基编码区cDNA,PCR扩增酶为高保真DNA聚合酶.将Nde I/HindⅢ彻底双酶切PCR产物定向连接到牛小肠碱性磷酸酶去5′端磷酸的同样彻底Nde I/HindⅢ双酶切的表达载体pT7-7中,转化感受态大肠杆菌DH5α获得转化子,用0.8%琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子,将阳性克隆进行单和双酶切分析鉴定.随机挑选两个阳性克隆进行DNA测序.结果:转化子的阳性筛选率为100%,限制性酶切分析结果表明插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符.DNA测序结果表明:两个重组小鼠CK2 β亚基克隆中的插入片段序列均与两种已报道的小鼠 CK2 β亚基 cDNA编码区序列分别存在一个碱基差异,但我们报道的这2个差异碱基与大鼠、兔、猪和人CK2 β亚基cDNA的编码区相应碱基序列一致.结论:本实验克隆的小鼠蛋白激酶CK2 β亚基cDNA编码区序列可能是正确的序列.
关键词：β调节亚基/蛋白激酶CK2/小鼠表达载体pT7-7分子克隆DNA序列分析
分类号：Q555+.7(酶)Q784(基因工程（遗传工程）)Q523+.8(核酸)
资助基金：广东省自然科学基金(011766)湛江市科技局科研项目(XK0002)
论文发表日期：2002-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1-4 )
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