人蛋白激酶CK2 3个亚基cDNA的克隆与测序
刘新光1
梁念慈1
陈小文1
马涧泉2
1.广东医学院生物化学和分子生物学研究所,广东湛江,5240232.中山医科大学生化教研室,广东广州,510089
摘要：目的:构建人蛋白激酶CK2 α、α′和β亚基cDNA重组表达质粒深入进行CK2结构与功能的研究.方法:利用RT-PCR、定向克隆和DNA测序等进行本实验.结果:通过反转录PCR从HL-60细胞中获得了人蛋白激酶CK2 α、α′和β亚基编码区cDNA,将Nde I /HindⅢ双酶切的3种PCR产物分别与同样双酶切的表达载体pT7-7进行定向连接.CaCl2法分别转化DH5 α获转化子,快速提取质粒DNA进行电泳初筛得到阳性克隆.限制性酶切分析结果表明插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符.每种CK2亚基都各随机挑选4个阳性克隆,PEG法进行纯化.采用PE ABI的Big Dye荧光标记的终止底物循环测序试剂盒,使用各种引物进行正反向DNA测序.通过测序分别在每种CK2 α、α′和β亚基的4个阳性克隆中筛选到2个、1个和2个含完全正确的人CK2 α、α′和β亚基cDAN的重组质粒克隆,其余的克隆均存在1～2个碱基突变.我们将这种含正确序列的重组质粒分别命名为pTCKA、pTCKA′和pTCKB.结论:CK2全套3个亚基重组质粒克隆的成功,将为在原核细胞中表达人CK2 α、α′和β亚基以及利用人CK2 α、α′和β cDNA作为探针进行深入研究打下基础.
关键词：α、α′、β亚基/蛋白激酶CK2/人表达载体pT7-7分子克隆DNA序列分析
分类号：Q555+.7(酶)Q784(基因工程（遗传工程）)Q523+.8(核酸)
资助基金：广东省卫生厅科研项目(B1997115;A2000487)
论文发表日期：2002-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 172-174 )
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