酵母细胞中构建HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库
黄功华
梁景耀
刘新光
梁念慈
1.广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东湛江,5240232.广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东湛江,5240233.广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东湛江,5240234.广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东湛江,524023
摘要：目的:以酵母穿梭表达质粒pGADT7-Rec为载体,采用CLONTECH SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术,在酵母细胞中构建HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库.方法:从体外培养的HL-60细胞中提取总RNA,利用经修饰的CDSⅢ引物合成cDNA第一链,在链的末端可自动延伸CCC,在反应体系中加入SMART ⅢTMOligo作为cDNA第二链合成的引物,进行长距离(LD)-PCR合成双链cDNA,后者经CLONTECH CHROMA SPIN+TE-4000柱纯化后,与线性质粒pGADT7-Rec共转化感受态酵母菌AH109,二者在酵母细胞中利用酵母细胞内具有较高的同源重组酶活性,进行同源重组成环行的有复制活性的文库质粒,在缺亮氨酸(LEU)培养板上筛选出所有克隆,即为人HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库.结果:共获得1.03×106转化子,文库扩增后,插入cDNA长度在0.1 kb～1.5 kb之间.结论:在酵母细胞中利用CLONTECH SMART技术成功构建了HL-60细胞的酵母双杂交cDNA文库.
关键词：酵母细胞HL-60细胞cDNA文库SMART技术同源重组
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：广东省自然科学基金(011766)教育部科学技术研究项目(03096)广东医学院校科研和教改项目(XK0002)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 1-3 )
英文信息