重组抗LMP1单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建及表达
黄秀兰1
唐旭东2
熊亮3
周克元2
1.广东医学院附属医院儿科研究室,广东湛江,524023;广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东湛江,5240232.广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东湛江,5240233.广东医学院赣南医学院预防医学系,江西赣州,341000
摘要：目的 体外拼装人抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1单链抗体(LMP1 scFv)/截断的鱼精蛋白截短体(truncated protamine,tP)融合基因,将其克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌中诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白.方法 设计融合基因LMP1 scFv/tP,在LMP1 scFv/tP的5'和3'端设计EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点;在DNAWORKS程序指导下设计成22个相互互补的寡核苷酸序列,经PCR扩增获得融合基因LMP1 scFv/tP,再将目的 基因片段亚克隆至pMD 18-Tsimple载体中,经过酶切鉴定和测序验证.进一步将目的 基因片段克隆至原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白并经SDS-PAGE和western blot验证.结果 各寡核苷酸片段经PCR扩增后可见明确的产物带,将获得的LMP1 scFv/tP融合基因构建至原核表达载体pET32a,经IPTG诱导后成功表达目的 蛋白.结论 成功获得LMP1 scFv/tp融合基因,并在大肠杆菌中成功诱导表达LMP1 scFv/tP融合蛋白,为该融合蛋白用于LMP1相关肿瘤的基因治疗奠定基础.
关键词：LMP1 scFv/tP基因拼装表达融合蛋白
分类号：R318.34(医用一般科学)
资助基金：重点学科建设项目(GX9307)广东省湛江市科技攻关计划(200402)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1-4,13 )
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