野生型PTEN基因重组腺病毒表达载体构建的改进及其鉴定
林观平1
李树梅2
熊亮3
周克元1
1.广东医学院生物化学与,分子生物学教研室,广东湛江,5240232.四川省攀枝花市十九冶医院妇产科 四川攀枝花 6170233.赣南医学院预防医学教研室,江西赣州,341000
摘要：目的 为改进构建野生型抑癌基因PTEN重组腺病毒表达载体的方法.方法 用抑癌基因PTEN与带有绿色荧光蛋白基因的穿梭载体pAdTrack-CMV重组后转化含腺病毒骨架载体pAd Easy1的E.coli BJ5183(Ad-1 cells),以获得重组腺病毒质粒,经限制酶PacⅠ线性化后 ,转染293细胞, 检测PTEN蛋白的表达,并以Ad-PTEN感染人乳腺癌MCF-7细胞后, 测其感染率.结果 获得PTEN基因的重组腺病毒表达载体(Ad-PTEN),受Ad-P TEN转染的293细胞发生肿胀或圆缩的形态改变,经PCR对传代的Ad-PTEN分析证实得到目的基因PTEN,荧光显微镜下能观察到293细胞内有绿色荧光.通过Western blot可检测到293细 胞中PTEN蛋白高效表达.Ad-PTEN感染的人乳腺癌MCF-7细胞, 感染率达80%～90%.结论 PTEN重组腺病毒表达载体可在细菌体内进行同源重组而构建,方法较简便、快速,且生成的病毒滴度高、感染率高.
关键词：重组腺病毒PTEN基因治疗
分类号：R73.37(肿瘤学)
资助基金：广东省重点学科建设资助项目(GX9307)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 115-119 )
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