小鼠B7-H4原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体的制备
肖德乾1
肖欢1
胡国艳1
那志萍2
郑淑华1
刘伟1
张良清2
徐军发1
1.广东医学院检验医学研究所,广东东莞,5238082.广东医学院附属医院麻醉科,广东湛江,524001
摘要：目的 探讨小鼠B7-H4原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体的制备.方法 采用特异性引物扩增小鼠B7-H4(mB7-H4)胞外功能区DNA,经酶切、拼接构建原核表达载体pET28a-mB7-H4.将构建的重组表达质粒转化入E.coli BL21 (DE3)菌株,采用IPTG诱导表达、Ni-NTA柱亲和层析纯化目的蛋白、SDS-PAGE分析蛋白纯度.将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定.结果 序列测定证实了构建的pET28a-mB7-H4重组表达载体含有mB7-H4编码序列,其序列分析与GenBank中公布序列对比一致,质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为26.5 KD的目的蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化后的目的蛋白达到电泳纯.双向琼脂扩散法检测抗体效价为1∶16,ELISA法检测抗体效价为1∶12 800,Western blot分析显示抗体能特异性结合mB7-H4.结论 成功制备了高表达重组mB7-H4蛋白的原核表达载体及高效价抗mB7-H4多克隆抗体,为进一步研究B7-H4的功能奠定了基础.
关键词：B7-H4原核表达载体基因表达多克隆抗体
分类号：R392.1(医学免疫学)
资助基金：广东省科学事业费计划(2006B36002021)广东医学院博士基金(B2006091)广东省医学科研基金(A2007450)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 481-484 )
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