重组人PRL-3蛋白的表达、鉴定和酶动力学分析
何太平1
梁念慈2
1.广东医学院营养与食品卫生学教研室,广东东莞,5238082.广东天然药物研究与开发重点实验室,广东湛江,524023
摘要：目的 构建融合蛋白pCold Ⅱ-His-PRL-3表达质粒,并进行诱导表达、纯化、鉴定和酶动力学分析.方法 通过基因重组技术构建pCold Ⅱ-His-PRL-3融合蛋白表达载体,并在ArcticExpress E.Coli中表达融合蛋白.经Ni2+-NTA层析纯化,PRL-3蛋白用SDS-PAGE和Western blot初步鉴定,基质辅助激光解吸/电离直角型飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)确证,并进行酶动力学分析.结果 重组载体pCold Ⅱ-His-PRL-3包含正确的PRL-3编码序列,经IPTG诱导后能正确表达融合蛋白,Western blot显示表达蛋白具有抗原性,质谱分析结果显示目的蛋白氨基酸序列与PRL-3蛋白完全相符.PRL-3酶的米氏常数Km为6.59μmol/L,催化常数Kcat为0.44 min-1.结论 构建的pCold Ⅱ-His-PRL-3重组载体可表达具有酶活性的PRL-3蛋白,为PRL-3酶抑制剂的筛选奠定了基础.
关键词：PRL-3蛋白表达酶动力学
分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)
资助基金：广东省科技计划(2007B030702003)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 359-363 )
英文信息