过表达及RNA干扰糖尿病相关锚定重复序列蛋白基因腺病毒的制备及鉴定
汪亚君1
左湘2
黄靓2
马国达2
1.广东医科大学附属医院临床医学研究中心,广东湛江,5240012.广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室,广东湛江,524001
摘要：目的 构建含糖尿病相关锚定重复序列蛋白(DARP)基因的重组腺病毒过表达及RNA干扰载体.方法 应用PCR技术扩增大鼠DARP基因序列,设计并合成shRNA序列,分别插入表达载体GV-314和GV-119,经基因测序鉴定.用重组DARP过表达和shRNA表达穿梭载体与辅助包装质粒pBHGloxAE 1共转染人胚肾细胞HEK293,进行病毒包装、出毒和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度.用重组腺病毒感染大鼠H9c2细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western Blot检测DARP蛋白表达.结果 基因测序显示DARP过表达及shRNA载体序列与原设计序列完全相符,转染HEK293细胞包装成功.DARP过表达和shRNA腺病毒明显影响H9c2细胞中DARP蛋白表达水平.结论 成功构建了大鼠DARP过表达及特异性shRNA腺病毒表达载体.
关键词：糖尿病相关锚定重复序列蛋白RNA干扰腺病毒H9c2细胞
分类号：R392.33(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(No.81400023)中国-塞尔维亚科技合作委员会第3届例会项目(No.3-13)广东省自然科学基金(No.2015A030313523)广东医学科研基金(No.A2015338)广东医学科研基金(A2014483)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 337-340 )
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