过表达及干扰人APE1重组腺病毒载体的构建与鉴定
郭润民1
吴子君1
黄瑞娜1
王志强2
姜佳美1
刘畅1
梁国标1
陈科辉1
李腾1
1.广东医科大学附属医院心血管内科,广东湛江524001;广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室,广东湛江5240012.广东医科大学临床医学研究中心,广东湛江,524001
摘要：目的 构建含过表达及干扰人APE1的重组腺病毒.方法 应用PCR技术扩增人APE1基因序列,设计并合成shRNA序列,分别插入pDC315-EGFP和pDC316-EGFP-U6表达载体,经基因测序鉴定.用重组APE1过表达和shRNA表达穿梭载体与辅助包装质粒pBHGdeltaE11ox3Cre共转染人胚肾细胞HEK293A,进行病毒包装、出毒和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度.用重组腺病毒感染人AC16心肌细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western blot检测APE1蛋白表达.结果 基因测序显示APE1过表达及shRNA载体序列与原设计序列完全相符,转染HEK293A细胞包装成功.APE1过表达和shRNA腺病毒明显影响人AC16心肌细胞中APE1蛋白表达水平.结论 成功构建了人APE1过表达及特异性shRNA腺病毒表达载体.
关键词：脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1RNA干扰AC16心肌细胞
分类号：Q754(分子遗传学)
资助基金：国家自然科学基金(No.81670348)广东省医学科学技术研究项目(No.A2016143)广东省自然科学基金(No.2016A030313678)广东省自然科学基金(2015A030310359)广东省自然科学基金(2016A030310359)湛江市科技计划(No.2014A01033)湛江市科技计划(2015C01006)博士基金(No.BJ201511)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 463-466 )
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