脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1基因敲低人肺癌细胞A549构建及其对线粒体功能影响
许文亚
李春艳
林子英
王亚红
杨拉维
刘刚
1.广东医科大学附属医院临床医学研究中心,广东湛江,5240012.广东医科大学附属医院临床医学研究中心,广东湛江,5240013.广东医科大学附属医院临床医学研究中心,广东湛江,5240014.广东医科大学附属医院临床医学研究中心,广东湛江,5240015.广东医科大学附属医院临床医学研究中心,广东湛江,5240016.广东医科大学附属医院临床医学研究中心,广东湛江,524001
摘要：目的 建立脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1(APE1)基因敲低人肺癌细胞A549,并初步观察线粒体功能变化.方法 APE1基因shRNA序列与pSIREN-RetroQ慢病毒载体经酶切连接重组体(pSIREN-RetroQ-shAPE1),再与病毒包装质粒共转染293T细胞;收集病毒液并感染A549细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株A549shAPE1.免疫印迹法检测稳定细胞株中APE1干扰效率.用双氧水处理A549 shCotrol和A549 shAPE1细胞24 h,分析细胞内ATP及活性氧(ROS)变化.结果 经PCR和测序鉴定成功构建重组慢病毒载体pSIREN-RetroQ-sh APE1,免疫印迹法证实A549 shControl和A549 shAPE1稳定细胞株构建成功;双氧水处理后,A549shAPE1细胞中ATP活性明显低于A549shControl细胞(P＜0.05),而ROS明显增加(P＜0.01).结论 APE1干扰可影响肺癌细胞中线粒体功能.
关键词：酶脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1A549细胞活性氧线粒体功能
分类号：R34(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金项目(8160009、81570062)广东省自然科学基金(2016A030313681)广东医科大学科研基金面上培育项目(M2015009)2017年度广东省医学科研基金(A2017010)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 140-143,147 )
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