pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒的构建与鉴定
卢晓晴1
李蕊1
陈浩明1
黎锡贤1
王艺1
石现丽2
1.广东药科大学生命科学与生物制药学院,广东广州 5100062.广东药科大学基础医学院,广东广州 510006
摘要：目的 构建pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒靶向敲低ZNF703.方法 根据人和鼠ZNF703基因序列中的外显子区在RNA干扰平台上(broadinstitute.org)设计shRNA的靶向序列,并根据pLKO.1中Age I和EcoR I酶切位点序列设计并合成ZNF703 shRNA的引物;对引物进行退火;将pLKO.1质粒进行酶切、胶回收;用T4酶进行连接、转化、涂板,对阳性克隆菌落PCR鉴定和测序鉴定;将构建好的质粒利用慢病毒包装并转染HCT-116细胞系,Q-PCR检测ZNF703的敲低效率.结果 成功构建pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒,并且利用病毒包装体系构建ZNF703 shRNAHCT-116细胞系,RT-PCR结果显示设计并构建的pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒可用于有效敲低ZNF703.结论 成功构建可用于有效敲低人或鼠源细胞系中ZNF703的pLKO.1-ZNF703 shRNA质粒.
关键词：ZNF703pLKO.1质粒shRNAHCT-116细胞
分类号：R34(基础医学)
论文发表日期：2024-04-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 152-156 )
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