抗IDH2 K280乙酰化修饰特异性抗体的制备与鉴定
冼雪敏1
李国丹2
汤喜连2
陈湖婷3
黄倩倩3
陈融融3
陈丽丽3
余华军4
伍俊5
张海涛6
1.广东医科大学医学技术学院,广东 东莞 523808;广东医科大学生物化学与分子生物学教研室,广东 湛江 524023;广东医科大学多肽与蛋白质研究应用重点实验室,广东 湛江 5240232.广东医科大学生物化学与分子生物学教研室,广东 湛江 5240233.广东医科大学生物化学与分子生物学教研室,广东 湛江 524023;广东医科大学多肽与蛋白质研究应用重点实验室,广东 湛江 5240234.广东医科大学生物化学与分子生物学教研室,广东 湛江 524023;广东医科大学实验动物中心,广东 湛江 5240235.广东医科大学多肽与蛋白质研究应用重点实验室,广东 湛江 524023;广东医科大学附属医院呼吸疾病研究所,广东 湛江 5240006.广东医科大学生物化学与分子生物学教研室,广东 湛江 524023;广东医科大学多肽与蛋白质研究应用重点实验室,广东 湛江 524023;广东医科大学实验动物中心,广东 湛江 524023
摘要：目的 制备识别异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)第280位赖氨酸残基(K280)乙酰化修饰的抗体,用于检测IDH2在该位点的乙酰化修饰.方法 利用在线数据库对IDH2蛋白的理化性质、跨膜结构、信号肽、蛋白结构及乙酰化位点进行生物信息分析.依据IDH2氨基酸序列合成3条包含K280的多肽,其中2条多肽的K280经乙酰化修饰处理.随后将这2条乙酰化多肽分别与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联,并免疫家兔以制备能够特异性识别IDH2 K280位乙酰化修饰的抗体.采用ELISA、Dot blot、Western blot、免疫组化对抗体效价和特异性进行检测.结果 生物信息学分析结果显示,IDH2 K280位乙酰化修饰和非乙酰化修饰蛋白在相对分子质量、理论等电点、带正电荷残基总数、不稳定指数、疏水性上有差异;三级结构预测结果表明IDH2在280号位点上乙酰化修饰和非乙酰化修饰突变体侧链在几何构型和长度上存在细微差异.合成的2条乙酰化修饰多肽和1条非乙酰化的多肽免疫家兔均成功获得相应的抗体;ELISA检测免疫血清抗体效价分别是1∶1 458×103、1∶1 458×103和1∶54×103.制备的识别IDH2 K280乙酰化修饰的抗体识别IDH2 K280乙酰化修饰性多肽的效价是识别非乙酰化多肽的效价的27倍;识别IDH2 K280乙酰化修饰性多肽的杂交信号强度是识别非乙酰化多肽的效价的20倍;IDH2乙酰化抗体能特异性识别IDH2 K280乙酰化修饰位点.结论 生物信息分析提示IDH2 K280乙酰化修饰可能影响IDH2蛋白的结构;制备的IDH2 K280乙酰化抗体能特异性识别IDH2 K280乙酰化修饰.
关键词：IDH2乙酰化肺腺癌抗体特异性生物信息学
资助基金：国家自然科学基金(81772634)湛江市科技发展专项资金竞争性分配项目(2022A01197)
论文发表日期：2025-06-30
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 256-264 )
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