慢病毒介导的HSV-2 gD2蛋白的表达及多克隆抗体的制备
康海仙1
任楚淇1
沈浩佳1
连澎烜1
黄伟胜1
欧阳清2
陈伟杰3
1.广东医科大学基础医学院,广东 东莞 5238082.广州市第十二人民医院病理科,广东 广州 5104203.广东医科大学医学技术学院,广东 东莞 523808
摘要：目的 采用慢病毒介导293T细胞表达单纯疱疹病毒Ⅱ型包膜糖蛋白2(HSV-2 gD2),免疫新西兰兔制备高效价的gD2多克隆抗体,为HSV-2病毒的检测及其基础研究提供便利.方法 将密码子优化的HSV-2病毒G Strain US6基因(MH790667.1)序列连接至慢病毒载体pLenti-CMV-gD2-6His中,重组慢病毒感染正常293T细胞并筛选出稳转株,从培养上清中收获分泌型gD2蛋白后采用Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白,与弗氏佐剂1∶1混合乳化后皮下注射免疫新西兰大白兔,加强免疫1次,ELISA检测兔血清中gD2特异性抗体(纯化抗原包板)的效价,Western blot检测载体病毒中gD2抗原蛋白的表达.结果 构建的慢病毒重组质粒序列与理论设计一致,稳转株表达的gD2-6His蛋白相对分子质量约为37 000,电泳条带位于40 000～55 000(糖基化修饰),二次免疫后兔血清中gD2特异性抗体滴度为1∶204 800,兔血清经1∶500稀释后作为一抗孵育可检测到疫苗病毒中gD2抗原蛋白的表达,条带特异.结论 成功表达高纯度分泌型gD2蛋白,并制备了高效价的兔多克隆抗体,便于后续HSV-2疫苗的研发.
关键词：HSV-2 gD2蛋白慢病毒多克隆抗体稳转株
资助基金：广东省基础与应用基础研究区域联合基金项目(2023A1515110538)广州市科学技术局市校(院)企联合资助项目(2024A03J0561)广东医科大学校级大学生创新创业训练计划项目(GDMU2023033)广东医科大学校级大学生创新创业训练计划项目(GDMU2023003)
论文发表日期：2025-06-30
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 265-270 )
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