串联亲和纯化标记的HMGB1细胞因子诱导片段1融合表达载体构建和蛋白纯化及其功能初步探讨
刘芸
邓鹏
刘铮
徐佳
吴向玲
姜勇
1.南方医科大学病理生理学教研室,广东省蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105152.南方医科大学病理生理学教研室,广东省蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105153.南方医科大学病理生理学教研室,广东省蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105154.南方医科大学病理生理学教研室,广东省蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105155.南方医科大学病理生理学教研室,广东省蛋白质组学重点实验室,广东,广州,5105156.南方医科大学病理生理学教研室,广东省蛋白质组学重点实验室,广东,广州,510515
摘要：目的:构建高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中细胞因子诱导片段1(CIF1)与串联亲和纯化(TAP)系统中纯化标签链霉亲和素结合肽(SBP)和钙调蛋白结合肽(CBP)序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础.方法:采用PCR方法分别扩增出CBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b/CBP-SBP-CIF.利用Ni-NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85%以上.采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞RAW 264.7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264.7细胞释放TNF-α的水平变化.结果:表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好.当蛋白浓度大于0.5 ng/μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性(P<0.05),并且在CIF1蛋白浓度0～2.5 ng/μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系.结论:原核表达纯化了His-CBP-SBP-CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF-α的分泌表达.
关键词：高迁移率族蛋白B1细胞因子诱导片段1链霉亲和素结合肽钙调蛋白结合肽质粒构建肿瘤坏死因子-α
资助基金：国家自然科学基金(30572151,30670828)广东省自然科学基金(05004730)广州市科技计划(2007J1-C0301,2002Z3-C7081)国家自然科学基金(U0632004)长江学者和创新团队发展计划(IRT0731)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 6-10 )
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